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拓撲異構酶 拓撲異構酶有哪些類型(2)

  除了DNA拓撲異構酶可以產生異構變化以外,很多能夠嵌入相鄰堿基之間影響堿基堆集作用的試劑,特別是片狀的染料分子.也能改變DNA的拓撲狀態,明顯的例子就是溴化乙錠。例如以SV40的CCC分子與溴化乙錠的結合試驗為例,當沒有染料時,此DNA為負超螺旋,具有較高的沉降常數(21S);當加入染料分子與核苷酸之比為0.05時,沉降數降至l6S,此時DNA為沒有超螺旋的松弛形式;當染料分子和核苷酸的比值增加到0.09時,沉降常數又上升到大約21S,此時DNA分子為正超螺旋。

  不過要注意的是,溴化乙錠并沒有改變Lk值,只不過是由溴化乙錠分子的嵌入,增加了局部DNA二級結構的緊纏狀態。因而,隨著嵌入染料分子數的增多,起初表現為負超螺旋的減少與消失,隨后便是正超螺旋的增加。這與單鏈DNA結合蛋白促進負超螺旋轉變為泡狀結構的情況是類似的。

  拓撲異構酶

  通過切斷DNA的一條或兩條鏈中的磷酸二酯鍵,然后重新纏繞和封口來改變DNA連環數的酶。DNA促旋酶。

  DNA拓撲異構酶

  為催化DNA拓撲學異構體相互轉變的酶之總稱。催化DNA鏈斷開和結合的偶聯反應,為了分析體外反應機制,用環狀DNA為底物。在閉環狀雙鏈DNA的拓撲學轉變中,要暫時的將DNA的一個鏈或兩個鏈切斷,根據異構體化的方式而分為二個型。切斷一個鏈而改變拓撲結構的稱為Ⅰ型拓撲異構酶,通過切斷二個鏈來進行的稱為Ⅱ型拓撲異構酶。屬于Ⅰ型的拓撲異構酶,有大腸桿菌的ω蛋白及各種真核細胞中存在的切斷-結合酶。

  Ⅱ型拓撲異構酶,有存在于細菌中的DNA促旋酶、噬菌體T4的拓撲異構酶Ⅱ以及真核細胞中依賴ATP的拓撲異構酶Ⅱ等。另外,噬菌體λ的irt基因產物和噬菌體φX174的基因A的產物等也具有切斷—結合酶的活性,可認為是拓撲異構酶之一種。Ⅰ型拓撲異構酶不需要ATP的能量而催化異構體化,作為反應的中間產物,在原核生物來說是游離型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端與酶形成共價鍵,而真核生物是3′-OH末端5′-磷酸末端與酶形成共價鍵。此酯鍵中所貯存的能量,可能在切斷端的再結合上起著作用。

  使超螺旋DNA在每一切斷—結合反應中,使L數發生一種變化,即松弛。將互補的單鏈環狀DNA轉變成具有螺旋結構的雙鏈環狀DNA,使單鏈DNA打結或解結。另外在二個環狀雙鏈DNA一個分子的一個鏈切斷時,形成鏈環狀二聚體的分子。

  在Ⅱ型拓撲異構酶中,DNA促旋酶可單獨催化閉環狀DNA產生超螺旋,這是獨特的。其它二個型的酶,除可使超螺旋松弛也需要ATP的能量外,還可催化促旋酶的催化反應。真核細胞的拓撲異構酶Ⅰ,參與核小體的形成,細菌的ω蛋白參與轉錄和某種轉位子的插入。促旋酶和T4拓撲異構酶Ⅱ參與DNA的復制和轉錄過程。

  DNA拓撲異構酶I催化4種反應

  ①超螺旋的松弛;

  ②繩結(knot)的形成;

  ③環狀雙鏈分子的形成;

  ④環狀雙鏈分子的連接。

  作用

  Ⅱ型拓撲異構酶

  Ⅱ型拓撲異構酶巧妙地執行了打開DNA雙螺旋的過程。它將DNA的一個雙螺旋結構切開,并讓另一個螺旋從缺口處穿過,在此之后一個雙螺旋便被打開。

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