可作X線直立前后位平片檢查，可見左上腹有一寬大液平面，右上腹亦有一液平面，此即為擴張的胃及十二指腸近段，整個腹部其他部位無氣體，形成“雙氣泡征”，此為十二指腸閉鎖的典型X線征象。十二指腸狹窄的平片與閉鎖相似，但十二指腸近端擴張較輕，液平略小，余腹可見少量氣體。
在新生兒腸梗阻時，禁忌作鋇餐檢查，可引起致死性鋇液吸入性肺炎，有時為了與腸旋轉不良作鑒別，可作鋇劑灌腸，觀察盲腸、升結腸的位置。但實際上并非必要，因腹部平片所見，已可確定診斷。年長兒病史不典型，有十二指腸部分梗阻癥狀者，可作吞鋇檢查，檢查后應吸出鋇劑。
近年在產前應用超聲斷層掃描測得腹腔內有兩個液性包塊，對診斷有一定價值，可為出生后早期手術提供依據。
有十二指腸閉鎖時，孕婦在妊娠早期可能有病毒感染、陰道流血等現象，常有羊水過多征。嬰兒出生后數小時即發生頻繁嘔吐，量多，含有膽汁，如梗阻在壺腹部近端則不含膽汁。
沒有正常的胎糞排出，或可排出少量白色粘液或油灰樣物，但亦可有1～2次少量灰綠色糞便。高度狹窄時的癥狀與閉鎖相似。狹窄程度輕者，間歇性嘔吐可出生后數周或數月出現，甚至在幾年后開始嘔吐。因屬于高位梗阻，一般均無腹脹，或僅有輕度上腹部膨隆，胃蠕動波少見。因劇烈嘔吐，有明顯的脫水、酸堿失衡及電解質紊亂、消瘦和營養不良。