1.流行病學資料:應注意發病前4~20天內是否去過恙蟲病流行區,是否曾在戶外工作,露天野營或在灌木草叢中坐,臥等,同時,還應注意流行季節,當地本病的流行情況等。
2.臨床表現:突然發病,畏寒或寒戰,高熱,食欲缺乏,顏面潮紅,淺表淋巴結腫大,肝脾腫大,斑丘疹,并可發現特征性焦痂或潰瘍,對懷疑患本病的患者應十分注意尋找焦痂或潰瘍,它多位于腫大,壓痛的淋巴結附近。
3.實驗室檢查:
(1)血象:外周血液白細胞數多減少或正常,重型患者可稍增高,分類常有核左移現象。
(2)血清學檢查:
①外-斐反應:
外-斐反應亦稱變形桿菌凝集試驗,患者血清中抗恙蟲病立克次體的抗體能與變形桿菌OXK抗原起凝集反應,為診斷提供依據,病程第1周 末僅少數(30%左右)陽性,第2周末為75%左右,第3周可達90%左右,效價可達1∶160~1∶1280,第4周即開始下降,至第8~9周多轉為陰 性。
②補體結合試驗:
陽性率較高,特異性較強,且持續陽性時間較長,可達5年左右,需選用當地多見株作抗原,也可采用多價抗原,因不同株的恙蟲病立克次體的抗原性可有較大差異。
③免疫熒光抗體試驗:
用間接免疫熒光抗體試驗(indirect immunofluorescent antibody test,IFAT)檢測患者血清中特異性抗體,在病程的第1周末開始出現陽性,第2~3周末達高峰,60天后逐漸下降,但可持續數年,有病后10年檢測 仍呈陽性的報告。
④斑點酶免疫測定:
用各種血清型的恙蟲病立克次體或部分蛋白質作為抗原,吸附在硝酸纖維膜上作斑點酶免疫測定(dot enzyme immunoassay,dot-EIA),檢測患者血清中各血清型的特異性IgG和IgM抗體,該法敏感度高,特異性強,可區分各種血清型。
⑤酶聯免疫吸附試驗與酶免疫測定:
以基因重組技術表達的恙蟲病立克次體分子量為56×103的蛋白質作為抗原,用酶聯免疫吸附試驗(enzyme- linked immunosorbent assays,ELISA)與酶免疫測定(enzyme immunoassay,EIA)檢測患者血清中抗恙蟲病立克次體的IgG和IgM抗體,其敏感度為86%~88%,特異性為84%~90%。
(3)病原學檢查:
①病原體分離:
常用小鼠作恙蟲病立克次體分離,可取患者的血液接種小鼠腹腔,每只接種0.5ml,多在接種后第7~9天發病,解剖瀕死的小鼠可發現雙肺充血,水腫,肝,脾,淋巴結充血腫脹,出現胸腔積液和腹水,取腹水涂片,腹膜,腸系膜,肝,脾或腎印片,干后用吉姆薩染色鏡檢(放大1000~1600倍),可于單核細胞和巨噬細胞的胞質中發現紫紅色,呈團叢狀分 布的恙蟲病立克次體,當一個恙蟲病立克次體侵入細胞后,在適宜的條件下可在局部胞質中繁殖為一團,故常呈團叢狀分布,若用抗恙蟲病立克次體抗體作免疫熒光試驗,在熒光顯微鏡下可見細胞內有黃綠色的熒光。
②分子生物學檢查:
根據恙蟲病立克次體編碼其分子量為56×103的主要表膜蛋白抗原的基因核苷酸序列,有人設計了各血清型間共同和不同的引物,用套式聚合酶鏈反應(nested polymerase chain reaction,nested-PCR)檢測Gilliam,Karp,kato,kawasaki和kuroki五個血清型的相應基因,具敏感度高, 特異性強的特點,認為可用于本病的診斷并鑒定血清型。